Determinación de endotoxinas por método LAL

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La prueba de lisado de amebocitos de limulus (LAL), se emplea para la detección de endotoxinas asociadas con las bacterias Gram negativas. Las endotoxinas bacterianas son agentes inflamatorios muy potentes, incluso después de la esterilización, y consisten de una cadena de polisacáridos y una fracción lipídica, conocida como el lípido A, las cuales son responsables de producir fiebre, y que no se eliminan mediante esterilización.

METRIX

El reactivo LAL proviene de   el Lymulus polyphemus que en ingles le llama horseshoe crab y en Latinoamérica, lo conocemos como cacerola de mar. Sin embargo este animal prehistórico, aunque parece un cangrejo, no lo es, ya que pertenece a los arácnidos, y posee ojos divididos en celdas (polyphemus) los cuales fueron el interés original de los investigadores. Los investigadores que poseen un alto sentido de la observación, notaron que cuando el animal tenía una herida, tenía como un coagulo que lo tapaba para impedir el ingreso de contaminantes a su cuerpo.

Ellos  sangraron al Lymulus y lo primero que notaron es que éste es de verdad de sangre azul, ya que portan cobre en lugar de hierro como lo hacemos nosotros

Al cabo de muchas investigaciones, lograron detectar que se trataba de una cascada de reacción, donde una pro enzima activa  a la enzima y ésta actúa sobre la proteína de coagulación lo que genera un coagulo muy débil que parece más bien un gel y por eso se le denominó a ésta prueba gel clot en inglés.

Este método es un método cualitativo y se refiere el resultado a menor que…. Y se especifica la sensibilidad del kit que puede ir desde 0.03 Unidades de Endotoxina hasta 0.250 Unidades de Endotoxina.

Esta prueba es excelente para la determinación en materia prima, incluyendo el agua inyectable para producir medicamentos que se administran por esa vía.

Se emplea en muchos laboratorios también para liberar medicamento, sin embargo para ello sería más útil una prueba cuantitativa como las pruebas cinéticas Turbidimétricas y Cromogénicas.

Ambos métodos son cuantitativos ya que ocupan un software que hace los cálculos con respecto a una curva de calibración que se mide espectrofotométricamente  y su sensibilidad es muy baja siendo para la prueba turbidimétrica de 0.01 Unidades de Endotoxina / ml. y para la cromogénica  de 0.005 Unidades de Endotoxina / ml.

La primera se emplea en donde los límites de liberación permiten tal sensibilidad y donde el costo de la prueba sea un factor importante. La prueba cromogénica siendo más sensible, se emplea para medicamentos o dispositivos que se introducen por vía intratecal.  La industria farmacéutica tiene el deber de determinar endotoxinas en todos sus productos inyectables así como en todos los dispositivos médicos.

En Metrix Laboratorios tenemos todos los reactivos, materiales, y equipos necesarios para determinar este ensayo, así como una amplia asistencia técnica, asesoría y capacitación.

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